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外泌体是一种直径约 30 - 150 nm的纳米级囊泡,起源于细胞内吞过程中形成的内体,再从细胞中释放到胞外。几乎所有细胞都可以分泌外泌体。干1细胞里有外泌体,肿1瘤细胞里也有外泌体。
形象的说,外泌体是一部货拉拉,exo粒径服务,装了自家一堆乱七八糟的东西(里面有miRNA,mRNA和lncRNA等小分子核酸,还有细胞1因子等蛋白),然后分泌出细胞外,再接着进入另一个细胞,卸车完事。NTA可以提供样本中颗粒的粒径分布和绝1对浓度,但不能够以NTA所提供的浓度数值这个单一的指标来定量外泌体。首先,我们必须理解NTA检测原理:该技术基于布朗运动,通过视频分析颗粒计数,可同时获取样本中颗粒的粒径和绝1对浓度。
因此,样本中的所有颗粒,都会被侦测并计入,而不能筛选出外泌体单独进行计数;同理:也不能通过NTA所提供的粒径分布情况这个单一的指标判断所提取出的内容物就是外泌体;例如下图为常见的粒径浓度分布图,可以说明所提取的内容物是在外泌体粒径范围内,但是否为外泌体还需要结合其他方法综合验证,譬如:透射电镜、western blot等。
国际细胞外囊泡学会(ISEV) 在2014年的提议,对于提取获得的外泌体,需要通过以下手段进行确认:
双层囊膜结构是外泌体重要标志之一,但普通光学显微镜难以观察到此种亚显微结构。而透射电子显微镜 (Transmission electron microscope, TEM) 分辨率可达0.1 ~ 0.2 nm,可将被观察物体放大至数百万倍,非常适合进行外泌体双层囊膜超微结构观测。
表观生物技术团队拥有丰富的外泌体电镜样本处理与鉴定经验,可为客户提供高质量外泌体TEM检测服务,获得样本中外泌体典型形态特征图片 (如图一)。